蔬菜农药残毒快速检测技术常见的问题 蔬菜农药残毒快速检测技术，具有简便、灵敏、快速、经济和对检测人员技术水平要求低等特点，成为我国当前检测蔬菜高毒农药残留比较普及的一种检测方法，广泛应用于蔬菜生产基地、蔬菜大中型批发市场、各大超市以及各县（市、区）检测站，为提高农产品质量，保障公众健康发挥了重大作用。但是在实际应用过程中，该技术常常出现样品空白值偏低、样品吸光度值偏高、抑制率为负值以及假阴性和假阳性等问题，给有关人员和部门带来很多不便。下面本人根据几年来的工作经验一些常见问题和大家共问探讨，希望对从事此检测工作的技术人员有所帮助。1检测原理 蔬菜农药残毒快速检测酶抑制技术，是根据有机磷和氨基甲酸酯类农药能抑制动物神经系统中乙酰胆碱酯酶的活性，造成神经系统传导介质乙酰胆碱的积累，影响神经正常传导，从而使动物中毒致死这一原理，用于农药残留的检测中。如果蔬菜的提取液中不含有机磷或氨基甲酸酯类农药或农药残留量较低，酶活性不被抑制，实验中加入的底物被酶水解或部分水解，水解产物再与加入的显色剂反应产生颜色；反之，不显色或颜色变化很小。用农药残毒快速检测仪（分光光度计）测定吸光值随时间变化，计算可得出抑制率，据此判定农药残留情况。2药品配制及样品前期处理2.1药品配制及保存药品的配制包括提取液、酶、底物和显色剂的配制。其中提取液的配制是最重要的，是其他试剂配制的稀释剂。由于所用药品纯度的差别，加之实验温、湿度对缓冲液pH值的影响，往往按标准配比配制出的提取液达不到规定值（pH=0.8）。所以我们建议在配制后应该用pH计对提取液pH值加以校正。酶液、底物、显色剂按要求配制一般不会有问题，但要控制好保存条件。酶液、底物、显色剂处于温度较高的环境中易变质失效，尤其是在夏天。因此，配制药液时可以采取分装制（分成3～5个小瓶），即用即取，从而保证药液质量，避免药品浪费。酶是此检测技术成功与否的关键。酶的种类、纯度、活性、贮存及反应时酶的浓度等都会对测试结果造成极大的影响。所以，我们对这些相关因素掌握或控制不好，分析的灵敏度、度和重现性将难以保证。2.2样品前期处理取样品时应按蔬菜种类不同选择适宜的部位。叶菜类去腐叶、枯叶、蕊叶，采集有代表性的不同植株的叶片；果菜豆菜类从表皮至果肉1～1.5厘米处取样，果肉不要取的过多；含叶绿素和其他色素较高的蔬菜取样时不要立即加液提取，否则容易被氧化，提取液颜色会逐渐加深，样品本底吸光值造成人为因素升高。2.3培养样品的制备选择容量与培养量相似的培养管，这样防止了微量的药液在加入时过多的挂在培养管壁上，而难以完全进入到培养液中，引起较大误差。同时培养箱的温度和培养时间要严格控制在37～38℃之间30分钟。3检测值常见的问题3.1空白值仪器操作首先要保证仪器有良好的稳定性，比色杯无色差（成套的比色杯一般不会有色差，对不成套的必须验证）。其次对从培养箱取出样品到上机这段时间的长短要严格把握。用丁酰胆碱酯酶的样品空白值随时间变化较大，丁酰胆碱酯酶稳定性较差、活性较高，加入底物后反应速度快，所以应尽量缩短操作时间，否则空白值快速减小而达不到要求；与此相反，用乙酰胆碱酯酶的样品受操作时间长短的影响不大，操作时间不必过于要求。不同的酶在不同型号仪器、检测条件的不同和酶化学性质上的差异，样品空白值也是不同的。3.2吸光值样品吸光值偏高是检测中常见的问题之一。酶活性降低、样品本底颜色深和反应中化学、物理干扰是其产生的根本原因。酶的失效引起其本身颜色的加深（由乳白色变为黄色），样品本底颜色较深，以及提取液中因含有样品组织液形成胶体溶液、乳浊液或悬浮液等使透过光被额外的吸收或被散色，透光率减小，在吸光度上表现为值的增大。3.3抑制率检测结果中偶尔会出现抑制率为负值，当个别样品有较小的负值误差（-10%以下），这是在允许范围之内的。它主要是由操作误差所导致的。酶分解底物，分解物再与显色剂结合的过程非常快，假如操作者不熟练会产生这样的人为误差，导致抑制率为负值。随着操作者操作水平的提高，这是完全可以避免的。3.4假阳性与假阴性假阳性是由于酶活性降低或失活，导致其在底物中不起作用，底物不能被水解，无法与显色剂结合显色造成的。其结果似乎与提取液中存在农药，酶的活性被农药抑制类似。假阴性是因为某种农药对某种酶抑制作用很小或无作用而产生的，表现出无农药的假象。除此，在反应过程中化学干扰都可能导致假阳性、假阴性问题的发生。我们认为检测人员只能通过选择有较好活性、较强敏感性的酶来尽量减少此类问题的出现。